从菠菜中提取叶绿素实验报告

　　【实验目的】

　　1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。

　　2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。

　　【实验原理】

　　叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg }；胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。

　　【实验仪器】

　　研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。

　　【实验步骤】

　　1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。

　　2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。

　　3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。

　　4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。

　　5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。

　　6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。

　　【实验记录】

　　虽然分层现象不是非常明显，但是还是可以看得见分层现象。

　　【结果与讨论】

　　1、做这个实验的时候，我觉得不应该用纱布挤干，因为个人感觉很多色素都被

　　纱布吸走了，导致后来的实验现象没有很明显，经过对比，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。

　　2、有机溶剂往往比较容易挥发，所以加入后要盖上表面皿。

　　3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。

　　4、若最后颜色没有明显的分层，可以加入几滴丙酮帮助分层。

从菠菜中提取叶绿素实验报告

　　禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。

　　一、 血凝试验操作程序

　　1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。

　　2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。

　　3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。第三排孔至第四排孔同上操作。

　　4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。

　　5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。

　　6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）

　　二、血凝抑制试验操作程序

　　1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4）

　　2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。

　　3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。

　　4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。

　　5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。

　　6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。

　　7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。

　　三、试验过程中的注意事项

　　1样品的保存及试验前处理

　　1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。

　　1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。

　　1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。

　　1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。

　　1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。

　　2器材的选择

　　2.1 酶标板的选择：

　　建议使用96孔90°V型板进行试验，通过反复试验证明：90°V型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。

　　2.2 移液的选择及使用：

　　①单道、多道可调微量移液应选择合适的量程，以便精确度的提高。

　　②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时

　　应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。

　　③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。

　　3试剂的保存及配置

　　3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。

　　3.2 PH7.2、0.01mol/L的PBS液的制备

　　①应尽量现用现配

　　②每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。

　　③由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。

　　④全部试验均采用同一种稀释液。

　　3.3 1%红细胞的制备

　　①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。

　　②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。

　　③经20xx~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。

　　④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。

　　⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。

　　3.4抗原液的配制

　　①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。

　　②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。

　　③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升PBS，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。

　　4结果的判定

　　每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。

　　5试验器具的清洗

　　每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%NaOH中4小时，清水反复冲净，再放入3%Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。

　　四、小结

　　在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。

从菠菜中提取叶绿素实验报告

　　【实验目的】

　　1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。

　　2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。

　　【实验原理】

　　叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素A(C55H77O5N4Mg)和叶绿素B（C55H70O6N4Mg）胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；

　　叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物。是胡萝卜素的羟基衍生物。当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。

　　【实验仪器】

　　研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。

　　【实验步骤】

　　1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。

　　2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。

　　3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。

　　4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。

　　5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。

　　6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。

　　【注意事项】

　　1.过滤时不能用滤纸，而是用脱脂棉。原因是滤纸能吸收色素，降低滤液中色素的含量，使实验效果不明显。

　　2.加入丙酮后要迅速、充分研磨，以防止丙酮挥发，使更多的色素溶解在丙酮中。

　　3.萃取过程中注意操作，防止溶液喷出。制备薄层板过程中注意基板的质量，防止玻璃边缘伤及手指。

　　4.牢记有机化学实验常规安全防范和急救措施。

从菠菜中提取叶绿素实验报告

　　一、实验目的

　　1、了解CA6140车床的总体布局以及主要技术性能指标。

　　2、了解CA6140车床的传动路线，理解传动过程中的变速原理。

　　3、了解主轴箱、进给箱、溜板箱等主要箱体不见的内部结构，理解其中操纵机构的工作原理。

　　4、了解CA6140车床上卡盘、刀架、尾座、挂轮架、丝杠和光杆等主要零部件的构造和功能，理解其工作原理。

　　二、实验设备及仪器

　　CA6140车床、三爪卡盘、卡盘扳手、刀架扳手、尾座扳手、内六角扳手、活动扳手、卷尺。

　　三、实验原理和方法

　　通过现场教学与实验相结合的方式让学生通过对CA6140车床的解剖、观察和分析，提高对机床的感性认识，加深对课堂所学理论知识的理解。重点认识和了解以下六个方面的内容。

　　1、CA6140普通车床的布局

　　CA6140是一种中等精度的卧式车床，适合加工各种回转表面的轴类、筒类和盘类零件，也可以加工各种常用的公制螺纹、英制螺纹、模数螺纹和径节螺纹。CA6140 车床的加工精度适中，加工范围宽，通用性强，是一种最常用的机械加工设备。CA6140车床的结构布局参见教材，学生可以通过与实物对照，来熟悉CA6140车床各部件的名称，了解各部件的功能及布局。

　　2、CA6140普通车床的主要技术性能指标

　　在本实验中，通过对车床进行实际测量或演示，了解车床的下述技术性能指标。

　　(1)床身上最大工件回转直径

　　(2)刀架上最大工件回转直径

　　(3)最大工件长度

　　(4)最大车削长度

　　(5)主轴内孔直径

　　(6)主轴正转与反转的级数及范围

　　(7)纵向与横向进给量的级数及范围

　　(8)车削螺纹的种类及范围

　　3、CA6140普通车床的主轴箱

　　主轴箱是车床中最重要的一个箱体部件，工作时工件的旋转运动和车刀的自动纵、横进给运动都要通过主轴箱传递。了解车床的工作原理，首先应从了解主轴箱的工作原理开始。对主轴箱的认识应着重从以下几个方面进行观察和了解。

　　1） 卸荷式带轮

　　2） 双向片式摩擦离合器

　　3） 变速操纵机构

　　4） 主轴运动的传动路线

　　5） 主轴箱内的润滑

　　4.CA6140普通车床的进给箱

　　进给箱是调节自动进给速度和改变进给方向的专门部件。主轴转速确定之后，在选择与主轴转速相适配的自动进给速度和进给方向时，可通过调整进给箱的操纵机构来实现。对进给箱的认识，应着重了解进给箱传动路线和操纵机构的工作原理。进给箱里有三套操纵机构，它们分别是：基本组的操纵机构、增倍组的操纵机构、螺纹种类变换操纵机构及丝杠、光杠传动转换的操纵机构。

　　5、CA6140普通车床的溜板箱

　　溜板箱的主要功能是将光杆或丝杠的旋转运动转换为直线进给运动，并带动溜板和刀架实现纵向或横向快速移动，用于非加工状态下快速调整车刀位置。

　　溜板箱内有纵向或横向机动进给操纵机构、换向机构、丝杠开合螺母机构、过载保护机构等。

　　对溜板箱的认识应重点观察和了解以下几个方面。

　　(1)丝杠开合螺母机构。

　　(2)纵向、横向机动进给操纵机构。

　　(3)快速移动操纵机构。

　　(4)互锁机构。

　　(5)安全离合器。

　　6.CA6140普通车床的卡盘、刀架、尾座、挂轮架、丝杠和光杠

　　CA6140普通车床的卡盘、刀架、尾座、挂轮架、丝杠和光杠是暴露在车床外边的部件可以直接观察到。在观察卡盘、刀架、尾座、挂轮架的结构时可以适当拆卸上面的零件，以便更清楚地了解其工作原理。

　　四、实验任务

　　1、观察CA6140车床整体结构，熟悉其各部件的名称，了解各部件的功能。

　　2、了解CA6140车床的主要技术性能指标及实现原理。

　　3、观察主轴箱双向片式摩擦离合器、齿形离合器和制动器的结构形式和工作原理。

　　4、对照结构图辨别主轴箱内每根传动轴的轴号，观察它们的传动顺序。

　　5、观察变速机构的工作原理，了解滑动齿轮的作用和操纵机构的工作原理。

　　6、分别观察主轴高速正转、低速正转和反转时的传动路线，记录传动时经过的轴、齿轮，并分别计算传动比。

　　7、观察进给箱内部结构，了解进给箱的传动路线及操纵机构的工作原理。

　　8、观察溜板箱内部结构，了解光杠、丝杠的运动传递原理，纵向进给和横向进给的工作原理，以及刀架快速移动机构的工作原理。

　　五、实验步骤

　　1、观察CA6140车床整体布局，熟悉各部件的名称，了解各部件的功能。

　　2、用卷尺测量CA6140车床的结构尺寸，了解其尺寸性能指标。开机演示，了解其运动性能指标。

　　3、打开主轴箱上盖，观察箱体内的双向片式摩擦离合器、齿形离合器和制动器的结构， 分析操纵机构的工作原理。

　　4、认真观察主轴箱内传动轴和传动齿轮的传动顺序，记录传动链的有关数据。

　　5、打开进给箱前盖，观察箱体内传动轴和传动齿轮的传动顺序，观察操纵机构的原理。

　　6、观察溜板箱内部结构，了解纵向进给和横向进给的工作原理，分析刀架快速移动机构的工作原理，了解溜板箱与纵向溜板的连接形式。

　　7、观察卡盘、刀架、尾座、挂轮架、丝杠和光杠的结构。

　　8、将车床按原状重新装好。

　　9、计算已记录的主轴箱中传动链的传动比。

　　10、填写实验报告。

　　六、注意事项

　　1、拆开车床时，如果车床带电应先切断总电源，并挂“严禁送电”的警示标志。

　　2、拆、装车床的零件时应在老师的指导下进行，注意安全，以免身体受伤。

　　3、对车床的零件应轻拿轻放，以免零件受损。

　　4、不要让任何物品掉进车床的箱体内。

　　七、思考题

　　1、变换车床主轴的正、反转向时，靠哪些零件或部件来实现

　　2、主轴箱里参与调整主轴转速的滑移齿轮有多少个靠它们可改变多少种正转转速多少种反转转速

　　3、说明主轴箱中使用的斜齿轮在传递运动时的优点。

　　4、从主轴箱到进给箱的运动是由哪些零件传递的？

　　5、说明光杠与丝杠在使用上的区别。